ВЫДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ ИЗ ТКАНЕЙ

Для изучения химической структуры и биологических особенностей белковых веществ весьма важно получить их в чистом, т. е. свободном от примесей, виде. Между тем получение отдельных белков, ли, как это принято говорить, индивидуальных белков в чистом виде, является задачей нелегкой. объясняется это тем, что белки легко связываются друг с другом, а также и с иными веществами с образованием комплексных соединений. Расчленить эти комплексы трудно.

Всякое выделение белков из тканей начинается их экстрагирования. Для экстрагирования применяется вода, растворы нейтральных солей, разбавленный водою спирт, слабые растворы кислот и щелочей и др.

С помощью различных растворителей удается получить из тканейг фракции, содержащие различные белки и иные вещества. Из этих фракций пытаются изолировать отдельные белки, по возможности в кристаллическом виде.

В 1889 г. впервые был выделен в кристаллическом виде альбумин из яичного белка. Удалось также без больших трудностей изолировать в кристаллическом виде гемоглобин. Следует, однако, указать, что после выделения указанных двух белков животного происхождения прошло свыше 30 лет до разработки новых приемов, позволивших получить в кристаллическом виде значительное количество белковых веществ. Большую роль здесь сыграло применение сернокислого аммония. Пользуясь различными концентрациями сернокислого аммония, можно фракцию водорастворимых белков, извлеченную из той или иной ткани, расчленить на отдельные части и из них при дальнейшей обработке получить белки в кристаллическом виде.

Получение белков в кристаллическом виде не всегда еще гарантирует выделение индивидуальных белков, так как иногда несколько близких друг к другу по своим свойствам белковых веществ кристаллизуются вместе с образованием кристаллов общей для них формы. В этих случаях кристаллические белки представляют собою смеси или комплексы, состоящие из нескольких индивидуальных белков. Так, например, установлено, что кристаллический миоген, выделенный из мышц, включает несколько индивидуальных белков. Неоднородными по своему химическому составу оказались кристаллический (3-глобулин молока и некоторые иные препараты кристаллических белков. Неоднородность состава препаратов кристаллических белков устанавливается физико-химическими методами (например, методом электрофореза, ультрацентрифугированием), а также изучением их биологических особенностей. Так, например, установлено, что кристаллический миоген обладает активностью нескольких ферментов. Учитывая специфичность действия ферментов, следует считать, что кристаллы миогена представлены не одним всего, а несколькими индивидуальными белками.

Несмотря на это, все же получение белков в кристаллическом виде является известным критерием их чистоты и часто их однородности.

Для разделения белков и их выделения из растворов часто пользуются методами электрофореза и хроматографии.

Метод электрофореза основан на том, что молекулы белка, находясь в растворенном состоянии, имеют электрический заряд. В электрическом поле они передвигаются к противоположно заряженному полюсу. Это явление носит название электрофореза.

В специально сконструированных приборах при строго определенных условиях в электрическом поле происходит передвижение белковых частичек, которое регистрируется с помощью специальных оптических устройств на фотопластинке. Скорость движения белка при электрофорезе выражается расстоянием, пройденным частичками белка за единицу времени при падении потенциала на 1 в при определенном значении рН и ионной силе раствора и различна для различных белков. Этим свойством пользуются-для разделения белков и их выделения.

На этом же принципе базируется широко применяемый метод электрофореза на фильтровальной бумаге, позволяющий работать с малыми количествами белка и не требующий сложной аппаратуры.

Хроматографическое разделение и выделение белков проводится пропускание” раствора белков через колонку, наполненную тем или иным адсорбентом. На различных участках адсорбента в колонке адсорбируются различные белки.

Осаждение белков из растворов с сохранением их нативных свойств может быть осуществлено также осаждением при температуре от 3 до —5° С некоторыми органическими жидкостями (ацетоном, спиртом).

Изолированные белки подвергают лиофильной сушке. При этом вода” удаляется из замороженных белковых препаратов в вакууме. Лиофильна” сушка широко применяется для получения в сухом виде медицинских препаратов — сывороток и вакцин.

Вы можете оставить комментарий, или ссылку на Ваш сайт.

Оставить комментарий